粘质沙雷伯氏菌注意事项

　　2、取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。

　　、微生物菌种应保藏于低温、清洁和干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退。

　　4、离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。

　　5、斜面菌种保藏时间通常为 -6个月，应根据菌种状况及时转接；冻干菌种保藏时间通常为年；菌种保存使优良菌种的性状保持稳定，人为地创造条件，使菌种的新陈代谢活动处于不活泼状态，即选取优良菌种的休眠体（孢子或芽孢）或富有生命力的悬浮液在低温或脱水状态下保存。

　　（1）脱水保存法

　　①石蜡油封存法，在斜面菌种培养物上,倒上灭菌后的石蜡油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低温干燥处保存，粘质沙雷伯氏菌保存中这种方法不适用于能利用石蜡油作碳源的微生物，保存期为一年以上。

　　②冷冻干燥法,将孢子悬浮液与保护剂（一般用脱脂牛奶或血清）相混合，放在安瓿管内于-20——- 0℃的乙醇浴中速冻。然后，在低温下用真空泵抽干，并用五氧化二磷或干冰使水汽结冻，熔封安瓿管，于低温下保存。保存期可达5——10年之久。

　　③沙土保存法，能产孢子的细菌、放线菌及霉菌可采用此法保存,即将沙和土以 :2比例混合，经稀酸处理洗净过筛,装入小试管内,装置高度为1cm;灭菌2—— 次，烘干后即可将在斜面培养基上生长良好的孢子，用无菌蒸馏水2——2.5ml制成孢子悬液，吸取少许加入沙土管中，经真空抽干，外观呈松散状态,于4℃冰箱保存，保存期可达5——7年。

　　（2）低温保存法

　　①液氮超低温保存法，将生长稳定期的粘质沙雷伯氏菌细胞悬浮在10％甘油或其他低冰点液体中，密封于安瓿管内，然后控制冷却速度，使安瓿管温度逐步下降至 - 5℃时，即可置于-150——-196℃的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种细菌、放线菌、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物，都可用此法长期保存。

　　②简单保存法，将琼脂斜面孢子培养物、菌丝悬浮液以及由麸皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培养物置于4℃冰箱保存,保存时间不超过1——2个月，若将谷物原料制备的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蜡，以隔绝外界空气和水汽,保持时间可达 ——4个月。

　　6、冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜（DMSO）对细胞不是完全无毒副作用，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作 较大，因此，必须在min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜（DMSO）最好选择进口产品。